Ключевой результат исследования
Иммуногистохимическое определение онкопротеина E7 HPV16 и HPV18 продемонстрировало прогрессивное нарастание экспрессии по мере увеличения степени тяжести цервикальных поражений, существенную конкордантность с результатами ПЦР и высокую диагностическую точность. ИГХ-детекция E7 является потенциальным комплементарным тканевым биомаркером, отражающим биологически активную онкогенную трансформацию.
Frontiers in Oncology, 10 сентября 2026 г. DOI: 10.3389/fonc.2026.1942646
Введение и обоснование
Рак шейки матки остаётся одной из наиболее значимых причин онкологической заболеваемости и смертности среди женщин во всём мире, особенно в странах с низким и средним уровнем дохода, где доступ к организованному скринингу и молекулярной диагностической инфраструктуре ограничен. Несмотря на значительные достижения в области вакцинации и скрининговых стратегий, бремя заболевания сохраняется, во многом вследствие поздней диагностики и персистирующей инфекции высокоонкогенными типами ВПЧ.
HPV16 и HPV18 являются клинически наиболее значимыми высокоонкогенными генотипами ВПЧ, вносящими существенный вклад в развитие цервикальной дисплазии и злокачественной трансформации. Малигнизация при ВПЧ-инфекции обусловлена прежде всего постоянной экспрессией вирусных онкопротеинов E6 и E7, которые инактивируют ключевые опухолевые супрессоры — белки p53 и pRb, что приводит к неконтролируемой клеточной пролиферации, геномной нестабильности и прогрессирующей эпителиальной дисплазии.
Проблема современных методов диагностики
Молекулярные ПЦР-тесты на ДНК ВПЧ обладают высокой чувствительностью для выявления вирусного присутствия, однако не позволяют дифференцировать транзиторную инфекцию от биологически активной онкогенной трансформации. p16-ИГХ является лишь косвенным суррогатным маркером ВПЧ-опосредованной трансформации, а не прямым подтверждением активности вирусного онкопротеина. Гистопатологическая интерпретация морфологически неоднозначных поражений также может представлять затруднения.
В связи с указанными ограничениями возрастает интерес к биомаркерам, направленным на выявление HPV E6/E7, благодаря их более тесной биологической связи с активной канцерогенной трансформацией. Онкопротеин E7 играет центральную роль в дисрегуляции клеточного цикла через нарушение pRb-опосредованной сигнализации. Иммуногистохимическое определение E7 обладает дополнительным преимуществом — сохранение тканевой архитектоники и возможность прямой визуализации локализации вирусного онкопротеина в поражённом эпителии.
Цель исследования
Целью данного исследования являлась оценка диагностической ценности, клинико-патологической значимости и тканевой локализации иммуногистохимической экспрессии E7 HPV16 и HPV18 при различных стадиях цервикальных поражений. Дополнительно оценивалась конкордантность между ИГХ и ПЦР на ДНК ВПЧ, а также диагностическая эффективность и независимая прогностическая ценность в отношении тяжести заболевания.
Материалы и методы
Когорта и критерии включения
Проведено ретроспективное исследование на архивных парафиновых блоках (FFPE) тканей шейки матки, полученных в Департаменте патологии Медицинского колледжа Университета Касым (Бурайда, Саудовская Аравия). Период забора образцов: 2014–2024 гг. Иммуногистохимический анализ выполнен ретроспективно в период с июня по декабрь 2025 г.
Критерии включения: подтверждённый гистопатологический диагноз, наличие адекватного FFPE-материала для ИГХ-исследования, полная клинико-патологическая информация, удовлетворительная сохранность ткани и наличие результатов ПЦР на ДНК ВПЧ.
Объём выборки: 109 образцов
В исследование включены 109 архивных образцов ткани шейки матки, представляющих спектр от неопухолевых изменений до инвазивной карциномы. Средний возраст пациенток — 50,7 ± 10,1 года, медиана — 53 года (IQR 41–59).
Распределение по диагнозам: HSIL — 34 (31,2%), LSIL — 26 (23,9%), SCC — 19 (17,4%), NILM — 11 (10,1%), аденокарцинома — 10 (9,2%), ASC-US/ASC-H — 4 (3,7%), AIS — 2 (1,8%), плоскоклеточная метаплазия — 2 (1,8%), койлоцитарные изменения — 1 (0,9%).
Иммуногистохимическое окрашивание
ИГХ-исследование выполнено на срезах FFPE-ткани толщиной 4 мкм. Депарафинизация проводилась в ксилоле с последующей регидратацией через нисходящие концентрации этанола. Термическая демаскировка антигенов выполнена при 100 °C в буфере Tris-EDTA (pH 9,0) в течение 40 минут.
Использованные первичные антитела:
- Santa Cruz® HPV16 E7 (sc-6981; разведение 1:50)
- Santa Cruz® HPV18 E7 (sc-365035; разведение 1:50)
Инкубация с первичными антителами — в течение ночи при 4 °C. Далее применялись mouse LINKER (Dako, Дания) и HRP-конъюгированное вторичное антитело (Dako, Дания). Визуализация иммунореактивности — с помощью DAB-субстрата в качестве хромогена с контрастным окрашиванием гематоксилином.
Контроли
В качестве отрицательного тканевого контроля использована ткань щитовидной железы с подтверждённым отсутствием ДНК HPV16 и HPV18 по данным ПЦР. Отрицательные реагентные контроли получены путём исключения первичного антитела. Положительные контроли — ткань карциномы шейки матки с подтверждённой ПЦР-позитивностью по HPV16 и HPV18.
Примечание о контролях
Авторы подчёркивают, что ПЦР-позитивность подтверждает наличие вирусной ДНК, но не обязательно указывает на активную экспрессию вирусного онкопротеина на уровне белка. Следовательно, положительный ПЦР-статус не всегда напрямую коррелирует с интенсивностью ИГХ-экспрессии в тканевых срезах.
Интерпретация и подсчёт результатов ИГХ
Интерпретация ИГХ выполнена независимо тремя исследователями с опытом гистопатологической оценки. Разногласия разрешались консенсусом с привлечением четвёртого независимого рецензента при необходимости. Межнаблюдательское согласие оценивалось по каппе Флейсса.
Цитоплазматическое окрашивание с ядерной позитивностью или без неё расценивалось как выражение экспрессии E7. Рассчитывался иммунореактивный балл (IRS, от 0 до 12) как произведение интенсивности окрашивания (0–3) на долю позитивных клеток (0–4):
- Негативная экспрессия: IRS 0–1
- Слабая: IRS 2–3
- Умеренная: IRS 4–8
- Сильная: IRS 9–12
Для первичного диагностического анализа ИГХ дихотомизировали на «позитивную» (любая специфическая интенсивность — слабая, умеренная или сильная) и «негативную» (полное отсутствие окрашивания). Дополнительно проведён запланированный анализ чувствительности с более строгим порогом позитивности (только умеренная и сильная экспрессия расценивались как позитивные).
Особое внимание уделялось паттернам тканевой локализации в зависимости от степени поражения: базальное/парабазальное эпителиальное окрашивание, полнослойная эпителиальная экспрессия, окрашивание в инвазивных опухолевых гнёздах.
Результаты
Диагностическая эффективность ИГХ-определения E7
Экспрессия E7 HPV16 и HPV18 прогрессивно нарастала с увеличением тяжести поражения, при этом наивысшая иммунореактивность наблюдалась при высокой степени плоскоклеточных интраэпителиальных поражений (HSIL) и инвазивной карциноме.
HPV16 E7 ИГХ: превосходящая диагностическая эффективность
HPV16 E7 ИГХ продемонстрировала лучшие диагностические показатели по сравнению с HPV18 E7 ИГХ: чувствительность 92,3% vs 90,0%, специфичность 83,9% vs 79,3%, точность 89,9% vs 83,7%, площадь под ROC-кривой (AUC) 0,925 vs 0,894.
Между ИГХ и ПЦР выявлена существенная конкордантность для обоих типов ВПЧ.
По данным многофакторной логистической регрессии, экспрессия E7 HPV16 и HPV18 определена как значимый независимый предиктор статуса заболевания.
Тканевая локализация
Гистопатологическая оценка продемонстрировала прогрессивные паттерны локализации: от фокального базального/парабазального окрашивания при поражениях низкой степени до диффузной полнослойной эпителиальной и опухоль-ассоциированной экспрессии при поражениях высокой степени и инвазивной карциноме.
Клиническое значение паттернов локализации E7
Переход от фокального базального/парабазального к диффузному полнослойному окрашиванию E7 параллелен прогрессии цервикальных поражений и может предоставлять клинически значимую информацию о биологически активной ВПЧ-опосредованной трансформации, особенно в диагностически сложных случаях.
Заключение
ИГХ-определение E7 HPV16 и HPV18 продемонстрировало сильную ассоциацию с тяжестью цервикальных поражений и существенную конкордантность с данными ПЦР, что подтверждает потенциальную ценность данного метода как комплементарного тканевого биомаркера в цервикальной патологии.
Результаты исследования свидетельствуют о том, что ИГХ-детекция E7 может предоставлять клинически значимую информацию о биологически активной ВПЧ-ассоциированной трансформации и улучшать характеристику поражений в диагностически затруднительных случаях, дополняя стандартные методы молекулярной и морфологической диагностики.