Иммуно­гистохимические исследования

Иммуногистохимические исследования — это углубленные морфологические исследования тканей, полученных в ходе биопсии, основанные на реакции «антиген-антитело».

Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При ИГХ-исследовании образец ткани наносится на предметное стекло и обрабатывается меченными антителами в результате чего образуется комплекс «антиген-антитело». Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркером. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов. ИГХ-исследования проводят одномоментно с гистологическим исследованием или из готовых гистологических блоков.

Наиболее частые показания к проведению ИГХ-исследования:

  • Скрининг рака шейки матки — исследование двух маркеров для ранней диагностики дисплазии с высокой степенью риска озлокачествления: p16INK4a + Ki-67
  • Первичное или вторичное бесплодие – для оценки потенциальной способности эндометрия к имплантации плодного яйца. Проводится диагностика рецепторного статуса эндометрия
  • Рак тела матки – для оценки гормональной чувствительности опухоли, уточнения прогноза и выбора метода лечения
  • Нарушения менструального цикла, дисфункция яичников, гиперплазия эндометрия – в качестве дополнительного исследования для оценки потенциальной эффективности гормональной терапии
  • Рак молочной железы – для оценки гормональной чувствительности опухоли, уточнения прогноза и выбора метода лечения

В нашей клинике наиболее часто используются ИГХ-исследования для уточнения характера поражения шейки матки, влагалища и вульвы. Для этого исследуются 2 антигена: Белок p16INK4a и Антиген Кi-67.

Белок p16INK4a представляет собой ингибитор циклин-зависимых киназ и играет важную роль в регуляции клеточного цикла эукариот. Этот белок участвует в опосредованном через белок ретинобластомы (pRB) контроле перехода клетки из фазы G1 в фазу S, он подавляет опухолевый рост; повышенная экспрессия p16INK4a может запускать остановку цикла клеточного деления. Многие виды опухолей характеризуются инактивацией гена p16INK4a, что приводит к нарушению регуляции клеточного цикла и бесконтрольной пролиферации клеток. Но в опухолях, связанных с трансформирующим действием ВПЧ, отмечается увеличение экспрессии данного белка. Экспрессия белка p16INK4a реактивно увеличивается при росте количества вирусных онкобелков ВПЧ Е6 и Е7. При этом повышение экспрессии p16INK4a оказывается неэффективным для регуляции клеточного цикла, поскольку онкобелки ВПЧ действуют на уровне белка ретинобластомы. Повышение экспрессии p16INK4a применительно к этому виду опухолей рассматривают как косвенный признак интеграции ВПЧ высокого риска в геном и трансформации эпителиальных клеток под действием ВПЧ.

Экспрессия Кi-67 позволяет выделить опухолевые клетки, находящиеся в активной фазе клеточного цикла на всем его протяжении (G1-, S-, G2- и M-фазы), кроме G0-периода. Пролиферативная активность опухолевых клеток представляет собой «фракцию роста» новообразования и является ведущим фактором как в механизме злокачественной трансформации клеток, так и в биологическом поведении уже возникших опухолей. Пролиферативная активность опухоли − одна из наиболее важных характеристик ее фенотипа, в значительной степени определяющая скорость роста новообразования, способность его к метастазированию, к ответу на лечебные мероприятия и исход онкологического заболевания. Многие факторы, влияющие на течение и исход онкологических заболеваний, свое патогенетическое действие на опухоль опосредуют через изменение пролиферативной активности.

В настоящее время доказано, что основным этиологическим фактором в индуцировании и развитии рака шейки матки является вирус папилломы человека (ВПЧ). В результате интеграции ВПЧ в геном эпителиальных клеток, в ядрах клеток происходит репликация вирусных онкобелков Е6 и Е7, которые могут вызвать неопластическую трансформацию с нарушением регуляции клеточного цикла. Гистологическая диагностика интраэпителиальной цервикальной неоплазии (CIN) исторически основывалась только на морфологической оценке метаплазированного эпителия и определении цитопатического воздействия ВПЧ. Рутинные гистологические методы не лишены субъективности оценки и иногда приводят к ложно-положительным или ложно-отрицательным диагнозам, что значительно сказывается на тактике прогноза и ведения пациентов. ИГХ-определение индекса пролиферации при исследовании экспрессии Ki-67 (MIB-1) является необходимым рутинным исследованием при любой онкопатологии. При дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80–100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки иммуногистохимически определяется усиленная экспрессия белка p16INK4a. ИГХ-определение экспрессии белка p16INK4a, в сопоставлении с индексом пролиферативной активности (экспрессия Ki-67), является одним из важных критериев для дифференциального диагноза дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II и III) и начальных форм рака шейки матки (Аdenocarcinoma in situ, микроинвазивная аденокарцинома).

Интерпретация результатов происходит в форме описательного ответа с указанием оценки экспрессии антител к белку p16INK4a и индекса пролиферативной активности Ki-67.

Морфологическая оценка ткани при ИГХ-исследовании производится согласно классификации ВОЗ. Проводится оценка экспрессии белка p16INK4a в неопластических клетках и подсчет количества окрашенных визуализирующим агентом ядер клеток опухоли, учитывается процентное соотношение окрашенных/неокрашенных ядер клеток на 100 учтенных клеток в 10-ти репрезентативных полях зрения при увеличении в 40х. Дается описательный ответ с указанием индекса пролиферативной активности (процент клеток, в которых определяется экспрессия антител к Ki-67).

Иммуногистохимические исследования материала, взятого в нашей клинике выполняется в специализированных лабораториях, имеющих большой опыт в этой области.